酶標(biāo)儀測(cè)定黃曲霉毒素的原理是什么?

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酶標(biāo)儀測(cè)定黃曲霉毒素主要基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)的原理,這是一種將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶的**催化作用相結(jié)合的分析技術(shù),具體原理如下:
抗原抗體特異性結(jié)合:在黃曲霉毒素的檢測(cè)中,首先將黃曲霉毒素的抗原包被在微孔板的表面。當(dāng)加入含有黃曲霉毒素(待測(cè)抗原)的樣品和一定量的酶標(biāo)記抗體(酶與抗黃曲霉毒素抗體結(jié)合形成的復(fù)合物)時(shí),樣品中的黃曲霉毒素和包被在微孔板上的抗原會(huì)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)記抗體上的特異性結(jié)合位點(diǎn)。也就是說,樣品中黃曲霉毒素含量越高,與酶標(biāo)記抗體結(jié)合的量就越多,那么能與包被抗原結(jié)合的酶標(biāo)記抗體就越少;反之,樣品中黃曲霉毒素含量越低,與包被抗原結(jié)合的酶標(biāo)記抗體就越多。
酶的催化作用:在抗原抗體反應(yīng)完成并經(jīng)過洗滌步驟去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入酶的底物。此時(shí),結(jié)合在微孔板上的酶標(biāo)記抗體中的酶(如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等)會(huì)催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng),生成有色產(chǎn)物。酶具有**的催化活性,少量的酶就能催化大量的底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物,而且酶促反應(yīng)的程度與結(jié)合在微孔板上的酶標(biāo)記抗體的量成正比。
吸光度與黃曲霉毒素含量的關(guān)系:生成的有色產(chǎn)物在特定波長(zhǎng)下具有一定的吸光度,使用酶標(biāo)儀在相應(yīng)波長(zhǎng)(如辣根過氧化物酶常用 450nm 波長(zhǎng))下測(cè)定微孔板中溶液的吸光度值。由于吸光度值與結(jié)合在微孔板上的酶標(biāo)記抗體的量成正比,而酶標(biāo)記抗體的結(jié)合量又與樣品中黃曲霉毒素的含量成反比,所以*終測(cè)得的吸光度值與樣品中黃曲霉毒素的含量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。通過測(cè)定一系列已知濃度的黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)樣品的吸光度值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出樣品中黃曲霉毒素的含量。
簡(jiǎn)而言之,酶標(biāo)儀測(cè)定黃曲霉毒素是利用抗原抗體的特異性結(jié)合以及酶對(duì)底物的催化顯色反應(yīng),通過檢測(cè)吸光度值來間接反映樣品中黃曲霉毒素的含量。
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